引言：病毒等微生世界在近兩年逐漸成為醫(yī)學(xué)診斷行業(yè)的熱點(diǎn)之一，國(guó)家藥監(jiān)局近期配套出臺(tái)了多個(gè)體外診斷試劑注冊(cè)技術(shù)指導(dǎo)原則。2021年4月15日，總局發(fā)布《輪狀病毒抗原檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2021年第24號(hào)）》，詳見(jiàn)正文。

輪狀病毒抗原檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查

指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)輪狀病毒抗原檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)審評(píng)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)輪狀病毒抗原檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。同時(shí)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)研究?jī)?nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他合理方法也可以采用，并應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

輪狀病毒（Rotavirus，RV）屬于呼腸孤病毒科輪狀病毒屬。輪狀病毒顆粒為球形，直徑70～75nm，負(fù)染后在電鏡下觀察，病毒外形呈車輪狀。輪狀病毒基因組總長(zhǎng)約18kb，由11個(gè)節(jié)段的雙股RNA組成，分別編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白（VP1～4，VP6和VP7）和5-6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP1～NSP5/6）。根據(jù)內(nèi)層衣殼蛋白VP6的血清型，目前主要將輪狀病毒分為A～G群。已知A、B、C群輪狀病毒可致人類急性胃腸炎，其中A群輪狀病毒最為常見(jiàn)，是引起嬰幼兒急性腸胃炎的主要病原體之一。B群輪狀病毒可在兒童和成人中暴發(fā)流行。C群輪狀病毒的發(fā)病率相對(duì)較低。

輪狀病毒根據(jù)VP6蛋白的兩個(gè)抗原決定簇可分為4個(gè)亞群（Ⅰ，Ⅱ，Ⅰ＋Ⅱ，非Ⅰ非Ⅱ）。根據(jù)VP7和VP4表達(dá)中和抗原的不同，又可分為多個(gè)血清型或基因型。VP7蛋白是糖基化的蛋白，決定G的血清型。VP4是蛋白酶敏感蛋白，決定P的血清型/基因型。目前世界范圍內(nèi)流行的A群輪狀病毒主要為G1、G2、G3、G4、G9、G12等血清型，P分型主要為P[4]、P[8]和P[6]等基因型。我國(guó)常見(jiàn)的A群輪狀病毒型別主要為G9P[8]、G3P[8]、G1P[8]、G2P[4]等。

輪狀病毒可污染食物、水和環(huán)境等，主要通過(guò)糞-口途徑傳播。輪狀病毒感染的典型癥狀為嘔吐、腹痛、腹瀉，部分伴發(fā)熱，嚴(yán)重脫水和/或電解質(zhì)紊亂者可能會(huì)出現(xiàn)休克、昏迷甚至死亡。

本指導(dǎo)原則適用于以抗原抗體反應(yīng)為原理，對(duì)人糞便樣本或其他適用樣本中的輪狀病毒進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，臨床用于急性胃腸炎患者輪狀病毒感染的輔助診斷。對(duì)于采用其他檢測(cè)方法的試劑，有利之處可參照?qǐng)?zhí)行。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

主要包括臨床適應(yīng)癥背景情況、產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他內(nèi)容。其中，產(chǎn)品描述應(yīng)明確試劑盒可檢測(cè)的輪狀病毒具體群組；其他內(nèi)容包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從檢驗(yàn)方法及臨床適用范圍等方面寫(xiě)明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)，以下簡(jiǎn)稱《公告》）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料包括抗原、抗體、質(zhì)控品、參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來(lái)源、制備過(guò)程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過(guò)程；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比篩選試驗(yàn)資料、供應(yīng)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)各主要原材料均明確質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1.特異性抗原、抗體

病原體特異的抗原、抗體是該類產(chǎn)品的關(guān)鍵原材料。對(duì)于抗原，如為天然抗原應(yīng)明確來(lái)源，如為重組抗原應(yīng)明確相應(yīng)的核酸或者蛋白序列信息。應(yīng)詳述抗體所針對(duì)的抗原表位和抗體制備所用的免疫原，提交確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)，還應(yīng)提交抗體來(lái)源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

2.其他主要原材料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原材料，如其他抗體、膠體金、硝酸纖維素膜、微孔板、樣本稀釋液等，均應(yīng)進(jìn)行選擇及驗(yàn)證，并提交相關(guān)資料。明確主要原材料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

3.試劑盒質(zhì)控品/質(zhì)控線

產(chǎn)品應(yīng)設(shè)置合理的質(zhì)控品/質(zhì)控線。質(zhì)控品（如適用）應(yīng)至少包含陰性和陽(yáng)性兩個(gè)水平。陽(yáng)性質(zhì)控品可選擇滅活的病毒株或臨床陽(yáng)性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本等。提交質(zhì)控品/質(zhì)控線相關(guān)原料的來(lái)源、選擇和性能確認(rèn)等相關(guān)研究資料，明確供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對(duì)質(zhì)控品/質(zhì)控線的檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求（試驗(yàn)有效性的判斷）。

4.企業(yè)參考品

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來(lái)源、選擇、制備、陰陽(yáng)性及濃度/滴度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與實(shí)際樣本相同。

陽(yáng)性參考品應(yīng)至少包括所有常見(jiàn)型別的病毒株或臨床陽(yáng)性樣本，并設(shè)置不同滴度水平。A組輪狀病毒型別應(yīng)至少包括G9P[8]、G3P[8]、G1P[8]和G2P[4]等。

陰性參考品應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià)，應(yīng)納入正常臨床樣本、含干擾因素的樣本及其他病原體特異性抗原陽(yáng)性樣本。

檢測(cè)限參考品可設(shè)置病毒株/臨床陽(yáng)性樣本的系列梯度樣本，其中應(yīng)包含檢測(cè)限附近水平。A組輪狀病毒型別應(yīng)至少包括G9P[8]、G3P[8]、G1P[8]和G2P[4]等。

精密度參考品一般包括弱陽(yáng)性水平、中/強(qiáng)陽(yáng)性水平。

（二）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

2.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

3.包被/標(biāo)記工藝研究，申請(qǐng)人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時(shí)間、條件等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

5.反應(yīng)條件確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、判讀時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

6.反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。

（三）分析性能評(píng)估

申請(qǐng)人應(yīng)提交對(duì)試劑盒的全部性能進(jìn)行評(píng)估的資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評(píng)估的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、人員及數(shù)量、適用儀器、儀器掃描模式、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來(lái)源（如涉及）等。分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)文件或指導(dǎo)原則進(jìn)行。建議著重對(duì)以下適用分析性能進(jìn)行研究：

1.樣本采集和處理

研究對(duì)保存液成分、濃度和使用量的要求；具體采樣量和采樣方式的要求；樣本運(yùn)輸和保存要求等。

2.最低檢測(cè)限

2.1最低檢測(cè)限的確定

在進(jìn)行最低檢測(cè)限研究時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行檢測(cè)限范圍的初步確認(rèn)。最低檢測(cè)限的確定試驗(yàn)建議采用梯度稀釋的病毒、每個(gè)梯度的病毒液重復(fù)3-5份、每份重復(fù)檢測(cè)不少于20次，通常將具有90%-95%以上陽(yáng)性檢出率的病毒水平作為最低檢測(cè)限。建議采用蝕斑形成單位（plaque forming units，PFU）或半數(shù)組織培養(yǎng)感染量（50% tissue culture infectious dose，TCID₅₀）法進(jìn)行病毒滴度的滴定，并采用上述兩種方式作為病毒濃度的表示方式。

2.2最低檢測(cè)限的驗(yàn)證

應(yīng)在最低檢測(cè)限水平附近，選擇不同來(lái)源的病毒株進(jìn)行最低檢測(cè)限的驗(yàn)證。

最低檢測(cè)限的驗(yàn)證應(yīng)包含輪狀病毒所有常見(jiàn)型別（至少包括G9P[8]、G3P[8]、G1P[8]、G2P[4]等，以及近年來(lái)我國(guó)流行的型別）。試驗(yàn)采用的稀釋液應(yīng)與適用樣本類型的性質(zhì)一致。應(yīng)提供詳細(xì)的病毒滴度的確定方法，同時(shí)應(yīng)詳細(xì)描述病毒樣本的確認(rèn)方法及驗(yàn)證結(jié)果。

3.包容性

申請(qǐng)人應(yīng)使用輪狀病毒所有常見(jiàn)型別的多個(gè)病毒株，進(jìn)行包容性的驗(yàn)證，以考察試劑對(duì)不同病毒株的檢出能力?？蓮淖畹蜋z出限、重復(fù)性、準(zhǔn)確性等方面進(jìn)行驗(yàn)證，提供樣本相關(guān)信息及病毒濃度的確認(rèn)方法、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

4.精密度

應(yīng)對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，包括檢測(cè)時(shí)間、分析儀、操作者、地點(diǎn)、檢測(cè)輪次等要素。設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣本、臨界陽(yáng)性樣本、（中或強(qiáng)）陽(yáng)性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆?/span>

5.特異性

5.1交叉反應(yīng)

用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面可能性：抗原結(jié)構(gòu)的同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀、采樣部位可能存在的其他微生物。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來(lái)源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

建議用于交叉反應(yīng)研究的病原微生物至少包括：腸道腺病毒，腸道病毒、杯狀病毒（如諾如病毒）、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、星狀病毒、金黃色葡萄球菌、傷寒沙門(mén)菌、甲/乙/丙副傷寒沙門(mén)菌、腸炎沙門(mén)菌、鼠傷寒沙門(mén)菌、小腸耶爾森菌、鏈球菌、痢疾志賀氏菌、彎曲桿菌、致瀉性大腸桿菌、艱難芽孢梭狀桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、弧菌等，以上病原體應(yīng)包含常見(jiàn)型別或亞型。建議使用病原體培養(yǎng)液/臨床樣本作為研究樣本類型。

應(yīng)使用至少20例正常人樣本進(jìn)行驗(yàn)證，考察樣本中存在的人體正常菌群、條件致病菌等的交叉反應(yīng)影響。

5.2干擾研究

建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下，使用病毒抗原臨界陽(yáng)性水平樣本、陰性樣本進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。

推薦用于干擾試驗(yàn)的物質(zhì)包括：血液（血紅蛋白、白細(xì)胞）、腸道炎性分泌液、粘液（粘蛋白）、脂肪、緩解腹瀉或其他胃腸道癥狀的藥物、抗細(xì)菌類藥物、抗病毒類藥物等。

6.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

建議采用高滴度的病毒株/陽(yáng)性樣本進(jìn)行梯度稀釋后分別檢測(cè)，每個(gè)梯度重復(fù)3至5次，將顯色深度或檢測(cè)值隨滴度升高反而變淺或降低時(shí)的滴度作為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)的最低滴度。

7.其他

應(yīng)提供企業(yè)參考品驗(yàn)證資料：采用至少三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

如有不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交性能評(píng)估資料，或提供不同包裝規(guī)格無(wú)性能差異的依據(jù)。如適用不同機(jī)型，應(yīng)分別提交性能評(píng)估資料，并在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【適用儀器】項(xiàng)下明確所有機(jī)型。注意不同樣本類型的適用性，根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)進(jìn)行分析性能評(píng)估。

應(yīng)明確試劑盒可檢測(cè)的輪狀病毒群組，提交采用該群組輪狀病毒進(jìn)行的分析性能研究資料，同時(shí)在產(chǎn)品名稱和產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【預(yù)期用途】項(xiàng)下明確可檢測(cè)群組。對(duì)于其他群組，建議進(jìn)行相應(yīng)的交叉反應(yīng)驗(yàn)證，如有可能存在的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【檢驗(yàn)結(jié)果的局限性】項(xiàng)下進(jìn)行提示。

（四）陽(yáng)性判斷值的研究

提交對(duì)申報(bào)試劑陰性/灰區(qū)/陽(yáng)性等結(jié)果判斷的陽(yáng)性判斷值（cut-off，CO）確定的研究資料，包括具體的試驗(yàn)方案、人群及受試者樣本選擇、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。建立陽(yáng)性判斷值使用的樣本來(lái)源的選擇應(yīng)考慮到不同的地理區(qū)域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響。另外，不同的樣本類型如有差異應(yīng)分別確定。

如適用，可采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）的分析方式來(lái)選擇確定合理的陽(yáng)性判斷值；如結(jié)果存在灰區(qū)（equivocal zone），應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。

（五）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開(kāi)封（使用）穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等。研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過(guò)程。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)提交不同使用環(huán)境條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響的研究資料。例如，試紙實(shí)時(shí)和開(kāi)封穩(wěn)定性研究，不同溫度和濕度條件下的性能研究等。

（六）臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫(xiě)等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說(shuō)明臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問(wèn)題。

1.研究方法

此類產(chǎn)品的樣本類型一般為糞便樣本。

對(duì)于已有同類產(chǎn)品上市的試劑的臨床研究，選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，評(píng)價(jià)兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性，評(píng)價(jià)指標(biāo)通常包括陽(yáng)性符合率、陰性符合率等。對(duì)比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測(cè)方法學(xué)、檢測(cè)性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性。

對(duì)于無(wú)同類產(chǎn)品上市的情況，其臨床研究可選擇與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究的方法，評(píng)價(jià)試驗(yàn)用體外診斷試劑的臨床性能。

2.受試者選擇

輪狀病毒抗原檢測(cè)試劑一般用于急性胃腸炎患者輪狀病毒感染的輔助診斷。根據(jù)試驗(yàn)用體外診斷試劑預(yù)期用途，臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇具有急性胃腸炎癥狀（如嘔吐，腹瀉等），急性胃腸炎相似癥狀的人群作為研究對(duì)象，制定合理的臨床試驗(yàn)受試者入組/排除標(biāo)準(zhǔn)。此外，考慮輪狀病毒感染的流行病學(xué)特征，臨床試驗(yàn)應(yīng)主要入組嬰幼兒人群，也應(yīng)納入一定量成年人病例，以及各種可能的干擾樣本和交叉反應(yīng)樣本。

3.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量和要求

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）符合要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)充分考慮試驗(yàn)用體外診斷試劑的特點(diǎn)和預(yù)期用途，選擇具有代表性的機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)，包括受試人群的代表性等。

4.臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)

該類產(chǎn)品臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽(yáng)性符合率、陰性符合率等。如試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比研究，其臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括臨床靈敏度、臨床特異度等。

5.臨床試驗(yàn)樣本量估算

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC申報(bào)產(chǎn)品臨床性能得到準(zhǔn)確評(píng)價(jià)的必要條件。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可選擇陰性符合率和陽(yáng)性符合率，或臨床特異度和臨床靈敏度，分別估算最低陰性樣本例數(shù)和陽(yáng)性樣本例數(shù)。

如臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對(duì)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。

公式中，n為樣本量；Z_1-α、Z_1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P₀為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，P_T為試驗(yàn)用體外診斷試劑評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

基于現(xiàn)有認(rèn)知，評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P₀）即輪狀抗原檢測(cè)試劑陽(yáng)性符合率建議不低于90%，陰性符合率建議不低于95%。獲得臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)后，證明產(chǎn)品相對(duì)于對(duì)比試劑的陰/陽(yáng)性符合率（置信區(qū)間下限）不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算，如精確概率法等。

對(duì)于尚無(wú)同類產(chǎn)品上市的情況，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性和臨床需求進(jìn)行合理的樣本量估算。

臨床試驗(yàn)樣本量除需滿足上述統(tǒng)計(jì)學(xué)估算的最低樣本量要求外，還需納入干擾樣本、交叉反應(yīng)樣本，同時(shí)還要考慮受試者脫落剔除率等情況。如臨床試驗(yàn)研究有更合理的樣本量估算方式，在說(shuō)明其合理性后亦可采用。

6.統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)于試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市產(chǎn)品（對(duì)比試劑）的一致性評(píng)價(jià)，一般選擇2×2表的形式總結(jié)兩種試劑/方法的檢測(cè)結(jié)果，并據(jù)此計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其可信區(qū)間。

對(duì)于不一致樣本，應(yīng)進(jìn)行原因分析。如臨床試驗(yàn)方案規(guī)定采用其他方法進(jìn)行確認(rèn)，則確認(rèn)結(jié)果不應(yīng)納入統(tǒng)計(jì)分析。

7.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)的同意。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見(jiàn)。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開(kāi)始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

9.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行統(tǒng)一的臨床試驗(yàn)方案，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。

10、臨床試驗(yàn)報(bào)告

臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，所有臨床試驗(yàn)操作應(yīng)符合說(shuō)明書(shū)的相關(guān)要求，例如由于糞便樣本不易均質(zhì)化，臨床試驗(yàn)中應(yīng)明確樣本采集方法和樣本用量等信息，對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法，得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（七）注冊(cè)檢驗(yàn)

應(yīng)提供符合產(chǎn)品技術(shù)要求的、在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告，應(yīng)提供連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)合格報(bào)告。該項(xiàng)目目前已有國(guó)家參考品，應(yīng)采用國(guó)家參考品進(jìn)行注冊(cè)檢測(cè)。

（八）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

下面對(duì)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

1.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1試劑盒用于定性檢測(cè)人體***樣本（如糞便）中的*群輪狀病毒抗原。

1.2相關(guān)背景信息：簡(jiǎn)要描述病原體生物學(xué)特征及致病性，感染后臨床表現(xiàn)，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，臨床目標(biāo)人群，產(chǎn)品功能（如可用于輪狀病毒感染的輔助診斷）等。

2.【檢驗(yàn)原理】

描述試劑盒的技術(shù)原理，可結(jié)合圖示進(jìn)行說(shuō)明。

3.【主要組成成分】

3.1詳細(xì)說(shuō)明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、成分、濃度等信息，如含有生物源性物質(zhì)，應(yīng)說(shuō)明其（生物學(xué)）來(lái)源、活性及其他特性；對(duì)于膠體金、免疫層析法等試劑應(yīng)描述試劑條/卡結(jié)構(gòu)組成。說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

3.2試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及備案憑證號(hào)或注冊(cè)證號(hào)（如有）等信息。

4.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期，明確溫濕度要求。

5.【適用機(jī)型】（如適用）

注明所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。酶標(biāo)儀應(yīng)明確波長(zhǎng)要求。

6.【樣本要求】

說(shuō)明對(duì)樣本采集、處理、保存等方面的要求，包括采樣要求、采集器的要求、離心條件、運(yùn)送條件、保存條件及效期、凍融要求、預(yù)處理方法等，相關(guān)內(nèi)容應(yīng)經(jīng)過(guò)前期驗(yàn)證。

7.【檢驗(yàn)方法】

7.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：檢測(cè)試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

7.2試劑配制方法，試劑開(kāi)封后使用方法等。

7.3樣本稀釋的方法。

7.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器條件等。

7.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

7.6可采用圖示形式顯示正確的檢驗(yàn)操作方法、程序及注意事項(xiàng)等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時(shí)間。

7.7特別說(shuō)明檢驗(yàn)操作過(guò)程中的注意事項(xiàng)。

8.【陽(yáng)性判斷值】（如適用）

明確陽(yáng)性判斷值，簡(jiǎn)要描述陽(yáng)性判斷值確定的試驗(yàn)方法。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

詳細(xì)描述檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)或計(jì)算方法，如有灰區(qū)判定，應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明灰區(qū)樣本的處理方法。建議可采用圖示形式描述結(jié)果判讀方法（例如膠體金、免疫層析法等試劑）。

10.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測(cè)方法及適用范圍等信息，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說(shuō)明。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

11.1對(duì)相應(yīng)國(guó)家參考品檢測(cè)的符合情況。

11.2企業(yè)內(nèi)部參考品符合率。簡(jiǎn)單介紹各企業(yè)參考品的組成、來(lái)源以及濃度梯度設(shè)置等信息。

11.3最低檢測(cè)限：簡(jiǎn)要介紹評(píng)價(jià)方法、所用病毒株或樣本情況以及評(píng)價(jià)結(jié)果。

11.4對(duì)包容性的研究情況進(jìn)行總結(jié)。

11.5對(duì)精密度的研究情況進(jìn)行總結(jié)。

11.6分析特異性

11.6.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類，及有/無(wú)交叉反應(yīng)的濃度水平。

11.6.2干擾物質(zhì)：說(shuō)明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無(wú)干擾反應(yīng)的濃度水平。

11.7鉤狀（HOOK）效應(yīng)：對(duì)高濃度鉤狀效應(yīng)的驗(yàn)證情況進(jìn)行總結(jié)。

11.8臨床試驗(yàn)：簡(jiǎn)要介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。

12.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對(duì)照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過(guò)了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測(cè)，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

12.2有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

三、參考文獻(xiàn)

1.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（局令第5號(hào)），2014年7月.

2.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則，2014年9月.

3.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則，2014年9月.

4.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式，2014年9月.

5.兒童輪狀病毒胃腸炎預(yù)防診療專家共識(shí)（2020年版）[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2020（04）.

6.Knipe D M，Howley PM. Fields Virology，6th ed. Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia，PA，2013.

四、起草單位

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心