I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品是組織工程醫(yī)療產(chǎn)品之一，今日，國(guó)家藥監(jiān)局發(fā)布《I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）》，并面向公眾公開征求意見。具體見正文。

I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的審評(píng)提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料的一般要求，申請(qǐng)人需依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，需在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

一、適用范圍

根據(jù)產(chǎn)品的形式，I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品主要分為兩大類：I型膠原軟骨修復(fù)凝膠，具有微觀網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)；I型膠原軟骨修復(fù)固體支架（包括海綿狀或膜片狀），可為單層或多層。本指導(dǎo)原則適用于I型膠原軟骨修復(fù)凝膠類產(chǎn)品。

本指導(dǎo)原則所涉及的I型膠原軟骨修復(fù)凝膠類產(chǎn)品，是指所用原材料限定于由動(dòng)物（牛、豬、鼠、魚等）的組織（皮膚、肌腱、骨骼等）提取、分離及純化（交聯(lián)或非交聯(lián)）得到的I型或I/III型膠原蛋白，可采用不同的物理、化學(xué)交聯(lián)方法及其它工藝制備而成的凝膠狀支架產(chǎn)品。

該指導(dǎo)原則不適用于重組膠原蛋白制成的產(chǎn)品，也不包括含細(xì)胞（如軟骨細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞）、生物因子（如干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白）等的產(chǎn)品，亦不包括預(yù)期與細(xì)胞或生物活性因子組合使用的產(chǎn)品。相關(guān)藥械組合產(chǎn)品應(yīng)遵循其它相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或指導(dǎo)原則等的要求，復(fù)合其他材料制備的特殊設(shè)計(jì)及創(chuàng)新設(shè)計(jì)的軟骨修復(fù)產(chǎn)品可參考本指導(dǎo)原則中適用的部分。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品的命名需采用《醫(yī)療器械分類目錄》或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的通用名稱，或以產(chǎn)品臨床預(yù)期用途、固化方式、適用部位為依據(jù)命名，需符合《醫(yī)療器械通用名稱命名規(guī)則》等相關(guān)法規(guī)的要求。

2.分類編碼

根據(jù)《醫(yī)療器械分類目錄》，分類編碼為13-10，管理類別為III類。

（二）綜述資料

1.產(chǎn)品描述

需全面描述產(chǎn)品I型膠原蛋白及其它成分的含量、純度及來源，產(chǎn)品結(jié)構(gòu)形式（結(jié)構(gòu)示意圖和/或?qū)嵨飯D）、主要成型工藝、工作原理、交付狀態(tài)、滅菌方式及貨架有效期等，以及區(qū)別于其他同類產(chǎn)品的特征等。

2.作用機(jī)理

需描述產(chǎn)品的作用機(jī)理，建議提供產(chǎn)品的操作步驟說明及圖示。

3.適用范圍和禁忌證

產(chǎn)品的適用范圍、適用人群、禁忌證需與申報(bào)產(chǎn)品的性能和功能相符。

3.1適用范圍

I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品一般用于限定面積的軟骨缺損的修復(fù)，需明確預(yù)期手術(shù)術(shù)式、植入部位及與其組合使用的其它器械和醫(yī)療產(chǎn)品。

3.2預(yù)期使用環(huán)境

明確預(yù)期使用的地點(diǎn)（如醫(yī)療機(jī)構(gòu)的條件），說明可能影響其安全性和有效性的環(huán)境條件。

3.3適用人群

明確目標(biāo)患者人群信息、患者選擇標(biāo)準(zhǔn)信息以及明確使用過程中需要考慮的因素。

3.4禁忌證

如適用，通過風(fēng)險(xiǎn)/受益評(píng)估后，針對(duì)某些疾病、情況或特定的人群，認(rèn)為不推薦使用該產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)明確說明，如對(duì)產(chǎn)品材料成分過敏的人群。

4.產(chǎn)品型號(hào)規(guī)格

提供產(chǎn)品各型號(hào)規(guī)格的劃分原則。對(duì)于存在多種型號(hào)、規(guī)格的產(chǎn)品，需明確各型號(hào)、規(guī)格的區(qū)別，采用對(duì)比表及帶有說明性文字的圖片、圖表，對(duì)各種型號(hào)、規(guī)格的結(jié)構(gòu)組成、功能、產(chǎn)品特征、性能指標(biāo)等方面加以描述。需提供體現(xiàn)產(chǎn)品設(shè)計(jì)特征的關(guān)鍵信息，如成分配比、體積或重量、產(chǎn)品裝量等。

5.與同類產(chǎn)品或前代產(chǎn)品的比較信息

應(yīng)當(dāng)提供同類產(chǎn)品（國(guó)內(nèi)外已上市）或前代產(chǎn)品（如有）的信息，闡述申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品的研發(fā)背景和目的。對(duì)于同類產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)說明選擇其作為研發(fā)參考的原因。

申請(qǐng)人需綜述同類產(chǎn)品國(guó)內(nèi)外研究及臨床使用現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)，同時(shí)列表比較說明申報(bào)產(chǎn)品與參考產(chǎn)品（同類產(chǎn)品或前代產(chǎn)品）在材料工作原理、結(jié)構(gòu)組成、制造材料、性能指標(biāo)、適用范圍、作用方式、應(yīng)用技術(shù)等方面的異同。明確產(chǎn)品有無使用新材料、新的活性成分、新技術(shù)、新設(shè)計(jì)或具有新作用機(jī)理和新功能。

6.包裝說明

提供產(chǎn)品的包裝信息，包括包裝形式、包裝材料、包裝工藝。對(duì)于具有微生物限度要求的醫(yī)療器械，應(yīng)當(dāng)說明保持其微生物限度的包裝信息。說明如何確保最終使用者可清晰地辨識(shí)包裝的完整性。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理資料

注冊(cè)申請(qǐng)人需對(duì)產(chǎn)品全生命周期實(shí)施風(fēng)險(xiǎn)管理，提交風(fēng)險(xiǎn)管理資料（參照GB/T 42062《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》），充分識(shí)別產(chǎn)品的設(shè)計(jì)、原材料、制造過程、產(chǎn)品包裝、滅菌、運(yùn)輸、貯存、使用等產(chǎn)品生命周期內(nèi)各個(gè)環(huán)節(jié)的安全特征，從生物學(xué)危險(xiǎn)（源）、環(huán)境危險(xiǎn)（源）等方面，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行全面的風(fēng)險(xiǎn)分析，并詳述所采取的風(fēng)險(xiǎn)控制措施。

風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告需包括生產(chǎn)和生產(chǎn)后信息，具體內(nèi)容參考GB/T 42062第9章和《醫(yī)療器械安全和性能的基本原則》的2.1.2e)f)。產(chǎn)品變更注冊(cè)和已在境外上市產(chǎn)品注冊(cè)時(shí)，申報(bào)資料中的風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告需包括上述內(nèi)容，將風(fēng)險(xiǎn)管理貫穿于產(chǎn)品的全生命周期。

2.醫(yī)療器械安全和性能基本原則清單

說明產(chǎn)品符合《醫(yī)療器械安全和性能基本原則清單》各項(xiàng)適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。

3.產(chǎn)品技術(shù)要求的主要性能指標(biāo)

產(chǎn)品技術(shù)要求需符合相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)法律、法規(guī)的相應(yīng)要求。在此基礎(chǔ)上，注冊(cè)申請(qǐng)人需根據(jù)產(chǎn)品的特點(diǎn)，制定確保產(chǎn)品安全、有效的技術(shù)要求。產(chǎn)品技術(shù)要求中試驗(yàn)方法需依據(jù)有關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)制訂，或經(jīng)過充分的驗(yàn)證。

3.1產(chǎn)品型號(hào)/規(guī)格及其劃分的說明

列表說明產(chǎn)品的型號(hào)、規(guī)格，明確產(chǎn)品型號(hào)、規(guī)格的劃分說明，明示產(chǎn)品組成及結(jié)構(gòu)。推薦采用圖示和/或表格的方式。

3.2性能指標(biāo)

根據(jù)產(chǎn)品特性，選擇適用的項(xiàng)目進(jìn)行規(guī)定，例如外觀（如性狀、顏色）、可見異物、裝量、膠原蛋白含量、復(fù)合成分含量（若適用）、總糖含量、脂肪含量、伴生的其他類型膠原、雜蛋白分析、水分、酸堿度、熾灼殘?jiān)?、酸水解產(chǎn)物、色氨酸檢查（去端肽時(shí)）、重金屬總量和微量元素、添加劑（包括溶劑）殘留、交聯(lián)劑殘留（若適用）、無菌性、環(huán)氧乙烷殘留（若適用）、細(xì)菌內(nèi)毒素等。

3.3檢驗(yàn)方法

產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法需根據(jù)技術(shù)性能指標(biāo)設(shè)定，檢驗(yàn)方法需優(yōu)先采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法（可參考本指導(dǎo)原則參考文獻(xiàn)中引用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)）；自建檢驗(yàn)方法需提供相應(yīng)的方法學(xué)依據(jù)及理論基礎(chǔ)，同時(shí)保證檢驗(yàn)方法具有可操作性和可重現(xiàn)性，必要時(shí)可附相應(yīng)圖示進(jìn)行說明，文本較大的可以附錄形式提供。

3.4附錄

產(chǎn)品材料的理化性能特征，以資料性附錄形式體現(xiàn)。對(duì)于膠原材料，一般需考慮熔點(diǎn)、膠原蛋白分子量（含動(dòng)力黏度）、膠原蛋白純度、肽圖，同時(shí)建議考慮膠原蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)分析、膠原蛋白自組裝性能、熱穩(wěn)定性、膠原蛋白-細(xì)胞相互作用等。

4.研究資料

注冊(cè)申請(qǐng)人需提供產(chǎn)品技術(shù)要求的研究和編制說明，包括功能性、安全性指標(biāo)的確定依據(jù)，所采用的標(biāo)準(zhǔn)或方法、采用的原因及理論基礎(chǔ)。需提供產(chǎn)品材料和產(chǎn)品設(shè)計(jì)相關(guān)理化及生物性能的研究資料，并提供其可接受的依據(jù)，必要時(shí)，與已上市同類產(chǎn)品相關(guān)性能進(jìn)行對(duì)比，以證明其安全有效性。研究資料選擇適用的項(xiàng)目進(jìn)行研究驗(yàn)證，主要包括但不限于如下研究項(xiàng)目：

4.1化學(xué)/材料表征研究

4.1.1膠原蛋白材料表征

需明確產(chǎn)品I型膠原的具體來源及其制備工藝。膠原蛋白材料的表征至少需包括如下項(xiàng)目：

4.1.1.1 I型膠原蛋白分子量

按照YY/T 1805.2《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 膠原蛋白 第2部分 I型膠原蛋白分子量檢測(cè)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法》 進(jìn)行測(cè)試。

4.1.1.2 I型膠原蛋白純度

膠原蛋白具有其他蛋白所沒有的三股螺旋結(jié)構(gòu)，可以在特異性的膠原蛋白酶作用下水解形成小分子多肽或者氨基酸；而非膠原蛋白卻不會(huì)受到膠原蛋白酶的水解作用。因此，可以利用膠原蛋白酶水解樣品，結(jié)合考馬斯亮藍(lán)對(duì)牛血清白蛋白（BSA）染色極限的確定，檢測(cè)膠原蛋白樣品中所含雜蛋白總量，進(jìn)而通過相應(yīng)計(jì)算得到膠原蛋白純度。

具體方法參照YY/T 1453《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 I型膠原蛋白表征方法》中的規(guī)定進(jìn)行。

4.1.1.3 肽圖

參照YY/T 1453《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 I型膠原蛋白表征方法》中規(guī)定方法測(cè)試。即，將樣品進(jìn)行熱變性后，通過胰蛋白酶使變性膠原降解；然后按照《中華人民共和國(guó)藥典》四部3405肽圖檢查法第一法規(guī)定的方法進(jìn)行。

4.1.1.4其它

隨著相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的更新，需進(jìn)一步開展膠原蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)分析、膠原蛋白自組裝性能、熱穩(wěn)定性、膠原蛋白-細(xì)胞相互作用等研究。

4.1.2產(chǎn)品組成成分表征

4.1.2.1 I型膠原蛋白鑒別

參照YY/T 1453《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 I型膠原蛋白表征方法》規(guī)定方法進(jìn)行測(cè)試。即，按照《中華人民共和國(guó)藥典》四部0541電泳法第四法規(guī)定的方法進(jìn)行，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法，分離膠濃度為7%，加樣量應(yīng)不低于20μg，比較樣品、I型膠原蛋白對(duì)照品經(jīng)過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析后的譜帶。樣品與I型膠原蛋白對(duì)照品電泳條帶應(yīng)一致。

4.1.2.2膠原蛋白含量

參照YY/T 1453《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 I型膠原蛋白表征方法》中規(guī)定方法測(cè)試。I型膠原蛋白原料經(jīng)干燥恒重后，精密量取供試品（約相當(dāng)于含氮量1.0mg～2.0mg），按照《中華人名共和國(guó)藥典》四部0731蛋白質(zhì)含量測(cè)定法第一法規(guī)定進(jìn)行，得到樣品中總蛋白含量，結(jié)果以干重計(jì)。

膠原蛋白含量（%）= 樣品中總蛋白含量（%）× 純度

4.1.2.3 總糖含量

參照YY/T 1453《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 I型膠原蛋白表征方法》中規(guī)定方法測(cè)試，以D-無水葡萄糖為對(duì)照，精確量取空白組（HCl 0.01mol/L）、對(duì)照組系列溶液（含D-無水葡萄糖20-100ug）、供試品溶液（含膠原2～20mg，HCl 0.01mol/L）各2ml，精確加入5%苯酚溶液1mL，然后迅速加入濃硫酸5.0mL，搖勻，40℃水浴保持40min，取出后迅速放入冰水中冷卻20min。利用樣品中多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，在波長(zhǎng)490nm處進(jìn)行比色測(cè)定。然后通過對(duì)照品吸光度-濃度回歸方程，計(jì)算出樣品中相當(dāng)于以D-無水葡萄糖的質(zhì)量。

4.1.2.4脂肪含量

參照YY/T 1453中規(guī)定方法測(cè)試。即，稱取干燥恒重的樣品3g-5g（約含脂肪20mg-100mg），移入到250mL燒瓶中，加入約100mg焦性沒食子酸和十一碳酸甘油三脂內(nèi)標(biāo)溶液2mL，加入幾粒沸石，再加入2mL 95%乙醇，混勻。然后加入8.3mol/L鹽酸溶液10mL，混勻。將燒瓶放入70℃-80℃水浴中水解40min。每隔10min震蕩下燒瓶，使粘附在燒瓶上的顆粒物混入溶液中。水解完成后，取出燒瓶冷卻至室溫。最后加入10mL乙醇混勻。按照GB/T 22223的方法對(duì)樣品中的總脂肪含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果以樣品干重計(jì)。

4.1.2.5伴生的其他類型膠原    

與I型膠原伴生的III型膠原、V型膠原，對(duì)I型膠原自組裝有影響，應(yīng)評(píng)估和控制其在終產(chǎn)品中的含量，以確保產(chǎn)品批次間的一致性。其中，III型膠原作為I型膠原主要的伴生膠原，可以采用天狼猩紅染色或者更精確的免疫組化、免疫熒光、ELISA等技術(shù)對(duì)I型和III型膠原進(jìn)行鑒別與量化。

天狼猩紅染色法鑒別I型膠原與III型膠原的原理是：由于天狼猩紅是一種強(qiáng)酸性陰離子染料，可與呈堿性的膠原反應(yīng)，使膠原纖維在偏振光照射時(shí)，產(chǎn)生明顯的雙折光現(xiàn)象。不同的膠原纖維具有不同的旋光性，在偏振光顯微鏡下呈現(xiàn)相異的顏色，借以區(qū)分I、II、III和IV型膠原。其中，I型纖維緊密排列，顯示很強(qiáng)的雙折光性，呈黃色或紅色的纖維；II型纖維顯示弱的雙折光，呈多種色彩的疏松網(wǎng)狀分布；III型纖維顯示弱的雙折光，呈綠色的細(xì)纖維；IV型纖維顯示弱的雙折光的基膜，呈淡黃色。因此，可以通過天狼猩紅染色對(duì)I型膠原和III型膠原進(jìn)行鑒別與量化。

天狼猩紅染色法：I型膠原溶液經(jīng)冷凍干燥后，通過常規(guī)石蠟包埋、切片（約5μm）、脫蠟至水，然后切片在1g/L的天狼猩紅溶液中染色1h。染色后切片經(jīng)過常規(guī)脫水透明后，用中性樹脂封固，室溫放置干燥。干燥后的切片在偏光纖維鏡下觀察拍照，并通過圖像分析軟件對(duì)兩種顏色的膠原纖維面積進(jìn)行分析，得到不同類型膠原的含量。

4.1.2.6重金屬總量和微量元素

其中，重金屬總量以Pb計(jì)。取膠原熾灼殘?jiān)逻z留的殘?jiān)凑铡吨腥A人民共和國(guó)藥典》0821重金屬檢查法第二法進(jìn)行。

微量元素參照YY/T 1453《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 I型膠原蛋白表征方法》中規(guī)定方法測(cè)試。即，精密稱取樣品，經(jīng)硝酸消化，制成供試品溶液，通過原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定鉻、鎘、銅、鐵、鎳、鉛、鉬的含量，用原子熒光光譜儀分析法測(cè)定砷和汞的含量。

4.1.2.7有毒物殘留

I型膠原提取制備過程中，可能存在有毒成分如三氯甲烷、過氧乙酸等殘留。參照《中華人民共和國(guó)藥典》相應(yīng)檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)試。

4.1.2.8酸堿度

酸堿度（pH值）是影響膠原分子發(fā)生自組裝的關(guān)鍵條件，pH為7.0-7.5 的膠原溶液可以順利的形成凝膠且成膠時(shí)間和成膠效果不會(huì)受到明顯的影響。按照《中國(guó)藥典》 四部通則0631的pH值測(cè)定法，取膠原凝膠前驅(qū)體溶液，采用酸度計(jì)測(cè)定pH值。

4.1.2.9外源性DNA殘留     

按照《中華人民共和國(guó)藥典》四部3407外源性DNA殘留量測(cè)定法“熒光染色法”或“定量PCR法”進(jìn)行?；蛘邊⒄誝Y/T 1876《組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 動(dòng)物源性生物材料DNA殘留量測(cè)定法：熒光染色法》中規(guī)定方法測(cè)試。

4.1.2.10 α-Gal殘留

α-半乳糖基抗原（簡(jiǎn)稱 Gal 抗原）是動(dòng)物組織、器官移植到人體引起超急性免疫排斥反應(yīng)的主要靶抗原，廣泛存在于牛、豬和其他低等動(dòng)物體內(nèi)，人體由于有 2 個(gè)堿基錯(cuò)位變異而不表達(dá) Gal 抗原，但人血清中存在高滴度的抗-Gal 抗體，因此當(dāng)人體接受含有 Gal 抗原的組織或生物材料時(shí)就會(huì)引起補(bǔ)體介導(dǎo)的抗體依賴型細(xì)胞毒性效應(yīng)，引起免疫排斥及免疫毒理反應(yīng)。Gal 抗原缺失小鼠已被廣泛應(yīng)用于異種免疫原性評(píng)價(jià)。參照YY/T 1561《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 動(dòng)物源性支架材料殘留α-Gal》中規(guī)定方法進(jìn)行測(cè)試。

4.1.2.11 EO殘留

對(duì)于經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌后產(chǎn)品的EO殘留量的可耐受接觸限量，建議參考GB/T 16886.7《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第7部分：環(huán)氧乙烷殘留量》中4.3.5.2的要求進(jìn)行規(guī)定。

4.1.2.12復(fù)合組分分布

對(duì)于含復(fù)合材料（如緩沖液、中和成分等）的產(chǎn)品，需通過紅外光譜、拉曼光譜、X射線能譜等方法對(duì)原材料中復(fù)合組分的分布進(jìn)行研究。

4.2物理和機(jī)械性能研究

4.2.1凝膠化性能和可注射性

凝膠化性能對(duì)原位注射賦型的膠原水凝膠非常重要，可以通過傾斜法、濁度法、光散射法以及動(dòng)態(tài)流變儀等檢測(cè)手段表征膠原分子聚合動(dòng)力學(xué)、聚合能力、凝膠化時(shí)間等。

4.2.1.1凝膠化性能

傾斜法：將調(diào)整到中性的膠原溶液裝入玻璃試劑瓶中，間隔固定時(shí)間倒置觀察玻璃瓶中溶液流動(dòng)情況，當(dāng)?shù)怪煤笕芤翰涣鲃?dòng)則表明膠原溶液已固化交聯(lián)，此時(shí)的時(shí)間定義為凝膠化時(shí)間。

流變學(xué)測(cè)試：將調(diào)整到中性的膠原溶液滴加在流變儀測(cè)試臺(tái)上，在固定剪切頻率0.1 rad/s和固定形變0.1%下，測(cè)試樣品儲(chǔ)能模量(G’)和損耗模量(G’’)隨時(shí)間的變化曲線，初始時(shí)儲(chǔ)能模量低于損耗模量，一定時(shí)間后，儲(chǔ)能模量等于損耗模量，該時(shí)間點(diǎn)定義為成膠時(shí)間。

水凝膠交聯(lián)度在很大程度上影響著物理性能，實(shí)際交聯(lián)程度與理論交聯(lián)程度的比值可直接反映交聯(lián)度。在某些情況下，可簡(jiǎn)單地通過計(jì)算成膠后浸出物的比例來反映水凝膠交聯(lián)程度。

4.2.1.2可注射性

主要通過測(cè)量剪切粘度來予以判定。

剪切變稀表征：以流變儀和固定形變（0.1%），進(jìn)行剪切應(yīng)力掃描或剪切頻率掃描，測(cè)試隨剪切應(yīng)力或剪切速率增加水凝膠樣品的粘度變化。

宏觀可注射性：通過壓縮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)推動(dòng)注射器所需力大小，考察不同條件下（儲(chǔ)存時(shí)間、注射濃度、溫度、針頭大小等）其可注射性能。

4.2.2水性環(huán)境下的形態(tài)穩(wěn)定性

4.2.2.1溶脹或收縮性能

正常軟骨的含水率約為70%（65%-80%），并因此維持著良好的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)透過性能。高的含水率有利于支架材料相關(guān)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的滲透運(yùn)輸。通過測(cè)定材料浸泡前后的質(zhì)量或者體積變化對(duì)材料的溶脹速率、或收縮性能進(jìn)行表征。

將固定尺寸的水凝膠樣品稱重并記錄體積，然后將樣品浸泡于pH 7.4的PBS緩沖液中，置于37℃恒溫?fù)u床中，放置固定時(shí)間，取出水凝膠材料，用濾紙擦掉材料表面多余水分，進(jìn)行稱重并測(cè)定樣品體積。分別計(jì)算溶脹和收縮情況下樣品質(zhì)量和體積變化率。

4.2.2.2保水性

制備好的水凝膠放置在舒適的自然條件下，記錄溫濕度變化。在一段時(shí)間內(nèi)測(cè)定凝膠的質(zhì)量變化，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示。前后質(zhì)量差與初始質(zhì)量之比定義為質(zhì)量變化百分比。              4.2.3體外力學(xué)性能

機(jī)械性能或者粘彈性在影響細(xì)胞行為與細(xì)胞誘導(dǎo)的基質(zhì)重塑中具有重要作用，根據(jù)材料的形態(tài)與大小選擇，通過流變儀、動(dòng)態(tài)力學(xué)分析儀（DMA）、納米壓痕儀（Nano-indenter）等對(duì)膠原水凝膠力學(xué)性能(壓縮、剪切等模式)與粘彈性（蠕變、應(yīng)力松弛、動(dòng)態(tài)力學(xué)）進(jìn)行測(cè)試。需注意材料模量等與組織的匹配度及體內(nèi)生物力學(xué)微環(huán)境影響下的穩(wěn)定性。

4.2.3.1彈性模量

以DMA對(duì)樣品進(jìn)行壓縮測(cè)試，分析其壓縮曲線，在低形變線性彈性區(qū)（一般0 -15%）計(jì)算樣品的彈性模量。

4.2.3.2蠕變和應(yīng)力松弛

在應(yīng)力松弛表征時(shí)，固定材料形變，觀察應(yīng)力隨時(shí)間的變化趨勢(shì)；在蠕變行為表征時(shí)，固定施加在材料上的初始應(yīng)力，觀察形變隨時(shí)間的變化趨勢(shì)。

4.2.3.3體外抗疲勞性能

對(duì)于承重部位的軟骨，在人的日常活動(dòng)中要經(jīng)歷反復(fù)的擠壓，因此對(duì)于膠原水凝膠軟骨修復(fù)材料的抗疲勞力學(xué)性能也提出了相應(yīng)的要求，可采用液體浸沒式材料動(dòng)態(tài)力學(xué)性能測(cè)試儀（DMA）等儀器對(duì)水凝膠的抗疲勞性能進(jìn)行考察。

循環(huán)壓縮強(qiáng)度：通過壓縮加載-卸載循環(huán)研究水凝膠的能量耗散。膠原水凝膠樣品被壓縮到一定應(yīng)變（一般0-30%）下循環(huán)10次。需根據(jù)應(yīng)力應(yīng)變定義出能量耗散方程。

通過兩種加載方法測(cè)試材料的抗疲勞性能：第一種為線性循環(huán)加載，使用DMA測(cè)試，以恒定加載速率加載至固定壓力，然后以相同速率卸載，循環(huán)一定次數(shù)，獲得應(yīng)力-應(yīng)變曲線；第二種為循環(huán)加載卸載，使用DMA進(jìn)行測(cè)試，以恒定的加載壓力和加載-卸載頻率，循環(huán)一定次數(shù)，獲得形變隨時(shí)間變化的曲線。

4.2.4微觀結(jié)構(gòu)

膠原水凝膠的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)模擬了細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的微觀結(jié)構(gòu)，影響細(xì)胞的粘附、鋪展和分化?？蓪⑺z樣品經(jīng)液氮處理后凍干，通過掃描電子顯微鏡(SEM)觀察纖維形態(tài)、直徑、分布以及多孔結(jié)構(gòu)。拍攝后的圖像可采用Image J等圖像處理軟件對(duì)其進(jìn)行處理和數(shù)據(jù)收集，而后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算，但凍干過程引起了凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)改變，故僅作為間接評(píng)價(jià)方法?；蛘撸z樣品直接采用低溫掃描電子顯微鏡(cryo-SEM)或環(huán)境掃描電子顯微鏡對(duì)樣品的孔結(jié)構(gòu)、纖維形態(tài)等進(jìn)行表征。

4.2.5傳質(zhì)性能

物質(zhì)傳遞性能指細(xì)胞、營(yíng)養(yǎng)、廢物物質(zhì)向基質(zhì)中或者在基質(zhì)中擴(kuò)散的能力，可通過熒光染料-共聚焦顯微鏡、擴(kuò)散室、光密度分析等表征。材料需有利于細(xì)胞黏附、遷移和增殖；有利于氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)傳輸；有利于代謝物的排出和組織的長(zhǎng)入。

為檢測(cè)膠原水凝膠營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的透過性能，可采用氯化鈉作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)中離子性物質(zhì)的代表，色氨酸作為小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代表，測(cè)定氯化鈉和色氨酸的透過率；同時(shí)，可通過共聚焦顯微鏡觀察熒光蛋白分子的擴(kuò)散來表征水凝膠對(duì)蛋白分子的透過率。

4.3生物學(xué)特性研究

4.3.1生物相容性評(píng)價(jià)資料

生物相容性評(píng)價(jià)應(yīng)遵循GB/T 16886.1《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第1部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評(píng)價(jià)與試驗(yàn)》相關(guān)要求，生物相容性評(píng)價(jià)資料可以參考《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)指南》，結(jié)合產(chǎn)品的預(yù)期接觸部位和累積使用的接觸時(shí)間，必要時(shí)開展生物學(xué)試驗(yàn)。生物學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)終點(diǎn)一般包括細(xì)胞毒性、致敏、刺激或皮內(nèi)反應(yīng)、材料介導(dǎo)的致熱性、急性全身毒性、亞急性毒性、慢性毒性、亞慢性毒性、植入反應(yīng)、遺傳毒性和致癌性。需結(jié)合物理和/或化學(xué)表征、降解性能等論證產(chǎn)品在上述各項(xiàng)生物學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定終點(diǎn)的安全性。

4.3.2生物學(xué)性能

對(duì)產(chǎn)品與軟骨修復(fù)相關(guān)的生物學(xué)性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，一般可開展產(chǎn)品對(duì)細(xì)胞的粘附、遷移、增殖、分化等影響的生物學(xué)性能評(píng)價(jià)試驗(yàn)。I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品（支架或凝膠）在植入軟骨缺損部位后，通過宿主細(xì)胞（骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、滑膜來源干細(xì)胞、周圍軟骨細(xì)胞）的遷移長(zhǎng)入、增殖、分泌細(xì)胞外基質(zhì)，預(yù)期將形成透明軟骨組織/纖維軟骨組織，實(shí)現(xiàn)對(duì)軟骨病損部位的修復(fù)再生。這個(gè)修復(fù)再生過程可能會(huì)長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月至1年，在這個(gè)過程中，患者被動(dòng)/主動(dòng)的活動(dòng)對(duì)植入部位施加的力學(xué)載荷也可能與產(chǎn)品的修復(fù)再生效果相關(guān)。

在擬進(jìn)行體外模擬研究而設(shè)定體外試驗(yàn)參數(shù)時(shí)，宜充分考慮與產(chǎn)品修復(fù)再生關(guān)節(jié)軟骨相關(guān)的體內(nèi)因素，如細(xì)胞類型、細(xì)胞數(shù)量、力學(xué)刺激等。用作體外研究的產(chǎn)品樣品宜具有代表性，需注意樣品尺寸（厚度）與全型產(chǎn)品不同對(duì)體外試驗(yàn)結(jié)果的影響。體外細(xì)胞試驗(yàn)宜選擇預(yù)期體內(nèi)發(fā)揮修復(fù)再生作用的主要細(xì)胞類型，細(xì)胞接種方式、細(xì)胞接種數(shù)量要能與植入后初期/早期能長(zhǎng)入/遷移入產(chǎn)品的方式和細(xì)胞數(shù)量相適宜。需要對(duì)采用的細(xì)胞培養(yǎng)條件提供合理化理由，例如考慮體內(nèi)軟骨修復(fù)時(shí)的體液環(huán)境/軟骨的營(yíng)養(yǎng)方式等，可考慮采用無血清培養(yǎng)基或低百分比含量血清的培養(yǎng)基、低氧培養(yǎng)條件等。體外細(xì)胞試驗(yàn)也可考慮施加力學(xué)刺激，例如靜水壓。

在體外細(xì)胞試驗(yàn)環(huán)節(jié)，需對(duì)與I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品軟骨修復(fù)相關(guān)的生物學(xué)性能建立半定量/定量的指標(biāo)和檢測(cè)方法。例如，如考慮I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品支持軟骨相關(guān)細(xì)胞的增殖、遷移和/或細(xì)胞外基質(zhì)的分泌等，這些性能與軟骨修復(fù)相關(guān)，則宜建立相應(yīng)的檢測(cè)細(xì)胞增殖、遷移和/或細(xì)胞外基質(zhì)分泌等試驗(yàn)方法，通過對(duì)多批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)/工藝研究，獲得相關(guān)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。由于體外細(xì)胞試驗(yàn)的特性和局限性，在研發(fā)/工藝研究過程中，需要通過動(dòng)物試驗(yàn)、臨床試驗(yàn)結(jié)果來驗(yàn)證這些預(yù)期生物學(xué)性能的相關(guān)性。推薦在這樣的體外試驗(yàn)/細(xì)胞試驗(yàn)、體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)/臨床試驗(yàn)環(huán)節(jié)中，確定I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品與其軟骨修復(fù)間具有因果關(guān)系的生物學(xué)性能。并且，由于體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)費(fèi)時(shí)和不易進(jìn)行，推薦建立體外生物學(xué)/細(xì)胞試驗(yàn)的定量檢測(cè)方法，對(duì)與產(chǎn)品軟骨修復(fù)具有因果關(guān)系的生物學(xué)性能進(jìn)行表征，從而可作為不同批次間I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量控制指標(biāo)之一。從另一方面考慮，這也是由于I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品材料特性影響因素眾多并且特性復(fù)雜，例如提取的I型膠原受動(dòng)物來源、提取工藝的影響，I型膠原具有復(fù)雜的蛋白質(zhì)組成和結(jié)構(gòu)，制成支架材料后又增加了與支架材料相關(guān)的特性，目前有關(guān)I型膠原蛋白或支架的某項(xiàng)/某些材料特性與軟骨修復(fù)性能因果關(guān)系的直接證據(jù)不足，一般認(rèn)為通過某項(xiàng)/某些材料特性的表征不能直接預(yù)示體內(nèi)修復(fù)效果。因此，宜在I型膠原材料特性表征的基礎(chǔ)上，建立對(duì)I型膠原生物學(xué)特性的體外生物學(xué)/細(xì)胞試驗(yàn)的定量檢測(cè)方法，達(dá)成對(duì)I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量控制。

4.3.3生物安全性評(píng)價(jià)資料

可參照《動(dòng)物源性醫(yī)療器械注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則》的要求提供產(chǎn)品免疫原性評(píng)價(jià)資料以及病毒滅活評(píng)價(jià)資料。

Ⅰ型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的免疫原性的研究、評(píng)價(jià)與控制資料主要包括：免疫原性毒理學(xué)/臨床相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)資料、免疫毒理學(xué)試驗(yàn)資料、免疫原性風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的質(zhì)量控制資料以及免疫原性相關(guān)不良事件資料等。應(yīng)對(duì)熱原進(jìn)行控制，致熱反應(yīng)推薦采用家兔法。且應(yīng)將內(nèi)毒素水平控制列入出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目。對(duì)于通過提純?nèi)コ庖咴晕镔|(zhì)的Ⅰ型膠原蛋白，可通過雜蛋白的含量指標(biāo)進(jìn)行控制；對(duì)于通過脫細(xì)胞工藝去除免疫原性物質(zhì)的Ⅰ型膠原蛋白，應(yīng)考慮殘留細(xì)胞數(shù)量、殘留DNA數(shù)量和/或殘留α-Gal抗原的數(shù)量等指標(biāo)。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)具體產(chǎn)品特性，考慮需增加的性能研究項(xiàng)目，如端肽、損傷相關(guān)的分子模式（DAMPs）、核酸降解酶以及特異性抗體檢測(cè)，對(duì)于以上列舉的項(xiàng)目中，如有不適用項(xiàng)，亦應(yīng)說明具體理由。

在選擇免疫學(xué)評(píng)價(jià)項(xiàng)目和設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案時(shí)應(yīng)充分考慮人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬差異。Gal抗原缺失動(dòng)物可能是評(píng)價(jià)動(dòng)物源性生物材料免疫原性的合適模型。如果結(jié)合“植入材料特異性抗體檢測(cè)”，可以同時(shí)檢測(cè)特異性抗Gal抗體之外的材料特異性抗體。Gal抗原缺失小鼠已被廣泛應(yīng)用于異種免疫原性評(píng)價(jià)。

在參考GB/T 16886.20分析選擇體外免疫學(xué)試驗(yàn)時(shí)，要充分考慮樣品制備的合理性，比如使用浸提液用于實(shí)驗(yàn)樣品時(shí)要充分分析和證明抗原物質(zhì)是否全部被有效浸提出來。應(yīng)客觀地分析實(shí)驗(yàn)體系的局限性。建議參考最新文獻(xiàn)研究，合理選擇體外免疫學(xué)試驗(yàn)方法，客觀地評(píng)價(jià)異種免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。

若產(chǎn)品采用常見的病毒滅活工藝，如有機(jī)物、射線、強(qiáng)酸等，其過程和方法相對(duì)成熟，申請(qǐng)人可采用文獻(xiàn)或歷史數(shù)據(jù)對(duì)病毒滅活效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，必要時(shí)針對(duì)申報(bào)產(chǎn)品開展病毒滅活試驗(yàn)驗(yàn)證。

鑒于產(chǎn)品主要成分為膠原，宜考慮病毒滅活工藝對(duì)膠原性能的影響，以及對(duì)產(chǎn)品有效性的影響。

4.4體外降解性能

適宜的降解行為對(duì)軟骨組織修復(fù)具有重要作用，尤其需要關(guān)注材料的降解速率和軟骨組織再生速率的匹配。

4.4.1宏觀形貌變化

采用相機(jī)、光學(xué)顯微鏡等對(duì)降解不同程度的材料進(jìn)行宏觀形貌的表征。

4.4.2體積和質(zhì)量的變化

將固定尺寸的水凝膠樣品稱重并標(biāo)記體積，隨后將其浸泡在 pH 7.4的 PBS溶液（或膠原酶溶液）中并轉(zhuǎn)移至恒溫?fù)u床（37℃）， 在指定時(shí)間點(diǎn) （如1、3、5、7、9、14和21天）取出，用濾紙擦掉樣品表面多余水分，進(jìn)行稱重并測(cè)定樣品體積。樣品的降解率以質(zhì)量變化率或者體積變化率表示，通過記錄樣品在不同時(shí)間點(diǎn)的降解率，獲得其隨時(shí)間變化的規(guī)律，分別計(jì)算質(zhì)量和體積變化率。

4.4.3 力學(xué)性能變化

采用動(dòng)態(tài)力學(xué)分析儀對(duì)不同降解時(shí)間點(diǎn)的膠原水凝膠樣品，參考4.2.3中的項(xiàng)目進(jìn)行力學(xué)性能表征。

4.5動(dòng)物試驗(yàn)研究

4.5.1動(dòng)物試驗(yàn)決策及設(shè)計(jì)

需按照《醫(yī)療器械動(dòng)物試驗(yàn)研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則》決策是否需開展動(dòng)物試驗(yàn)研究。如開展動(dòng)物試驗(yàn)研究，需按照《醫(yī)療器械動(dòng)物試驗(yàn)研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則 第二部分：試驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)施質(zhì)量保證》進(jìn)行，并遵循3R原則。需關(guān)注動(dòng)物模型建立的科學(xué)性和合理性，以及對(duì)臨床的借鑒意義。

對(duì)于I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品，體內(nèi)降解動(dòng)物試驗(yàn)研究可與常規(guī)動(dòng)物試驗(yàn)研究合并開展。I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的動(dòng)物試驗(yàn)可以使用兔、犬、豬、羊等不同種屬的動(dòng)物模型，采用形態(tài)學(xué)、組織生物化學(xué)、生物力學(xué)分析等進(jìn)行評(píng)價(jià)。動(dòng)物試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)宜明確的關(guān)鍵內(nèi)容見本指導(dǎo)原則附錄。

4.5.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的選擇

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型應(yīng)符合動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)康?，建立合適的動(dòng)物疾病模型用于研究，并詳細(xì)說明選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量應(yīng)保證結(jié)果具有可靠性，并結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)考慮。如選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型對(duì)于產(chǎn)品應(yīng)用于人體的安全性分析具有局限性，需對(duì)研究結(jié)果的影響進(jìn)行詳細(xì)說明。

研發(fā)產(chǎn)品的生物學(xué)效應(yīng)、機(jī)械性能、降解周期、降解產(chǎn)物同組織的相容性及組織反應(yīng)研究中，宜盡量選用符合相關(guān)國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，如兔、豬、犬、羊等。需要考慮I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的固定方式以及材料脫落風(fēng)險(xiǎn)。

4.5.3受試器械和對(duì)照品

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)使用的受試器械和對(duì)照品進(jìn)行詳細(xì)的描述，包括產(chǎn)品名稱、結(jié)構(gòu)及組成（含配合使用的附件）、型號(hào)規(guī)格、使用數(shù)量、是否重復(fù)使用等信息。受試器械應(yīng)為典型性產(chǎn)品，對(duì)照品宜優(yōu)先選擇已上市的同類器械作為對(duì)照品。適當(dāng)時(shí)，動(dòng)物試驗(yàn)中可設(shè)立陰性對(duì)照組和（或）空白對(duì)照組。

4.5.4動(dòng)物試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量可結(jié)合研究目的、研究假設(shè)（如適用）、文獻(xiàn)信息、同類產(chǎn)品經(jīng)驗(yàn)等方面估計(jì)動(dòng)物試驗(yàn)數(shù)量。受試器械組關(guān)鍵觀察點(diǎn)通常包括至少6只可評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。另一方面，建議預(yù)估動(dòng)物試驗(yàn)數(shù)量時(shí)，考慮因各種原因?qū)е聦?shí)驗(yàn)動(dòng)物過早死亡的情況。

動(dòng)物試驗(yàn)的觀察時(shí)間宜根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途，評(píng)價(jià)指標(biāo)及降解周期選擇研究持續(xù)時(shí)間，同時(shí)宜參考同類產(chǎn)品的研究情況。建議觀察時(shí)間點(diǎn)為1m、3m、6m、12m或以上。動(dòng)物試驗(yàn)應(yīng)能觀察到產(chǎn)品降解特征且應(yīng)觀察到產(chǎn)品完全降解、吸收，并且產(chǎn)品對(duì)靶組織及其他組織（如適用）的影響達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。在研究中應(yīng)選擇多個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，其設(shè)定應(yīng)有合理依據(jù)。

4.5.5評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

按照臨床標(biāo)準(zhǔn)推薦的療效指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并表征產(chǎn)品的降解特征。

在動(dòng)物試驗(yàn)中，應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行完整的尸檢，包括大體和詳細(xì)的組織病理學(xué)檢查，評(píng)估指標(biāo)至少包括產(chǎn)品降解、組織再生等情況。建議評(píng)價(jià)指標(biāo)詳見本指導(dǎo)原則附錄。

4.5.6動(dòng)物試驗(yàn)方案和報(bào)告要求

動(dòng)物試驗(yàn)研究方案和研究報(bào)告應(yīng)至少包括但不局限于以下內(nèi)容：

 試驗(yàn)?zāi)康?/p>

 試驗(yàn)器材或試劑

 動(dòng)物的種類、數(shù)量及該種類作為受試動(dòng)物的合理性解釋及

選擇依據(jù)

 試驗(yàn)方法（樣品準(zhǔn)備、動(dòng)物準(zhǔn)備、手術(shù)方法）、術(shù)前準(zhǔn)備、

目標(biāo)器官/組織、手術(shù)切口控制等

 對(duì)照組類型和/或?qū)φ债a(chǎn)品的類型和選取依據(jù)

  動(dòng)物模型的種類及建立方法

  產(chǎn)品的使用步驟及時(shí)間

  觀察方法、觀察指標(biāo)與觀察周期

  數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析過程

 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)與試驗(yàn)結(jié)論

 有效性標(biāo)準(zhǔn)

 安全性指標(biāo)

 試驗(yàn)研究的結(jié)論

4.6滅菌工藝研究

描述用于保證產(chǎn)品無菌的質(zhì)量保證體系，明確滅菌工藝（方法和參數(shù)）和無菌保證水平（SAL）。I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的無菌保證水平（SAL）需達(dá)到10-6。

該類產(chǎn)品一般為滅菌包裝交付，需提供滅菌工藝驗(yàn)證報(bào)告。對(duì)于經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌的產(chǎn)品，需提供滅菌結(jié)果確認(rèn)和過程控制報(bào)告，具體可參照GB 18279系列標(biāo)準(zhǔn)。

對(duì)于經(jīng)輻照滅菌的產(chǎn)品，需明確射線種類、輻照劑量及相關(guān)的驗(yàn)證報(bào)告。需評(píng)價(jià)滅菌方法（包括不同輻照源）對(duì)于產(chǎn)品性能的影響，并提供驗(yàn)證性能的確定依據(jù)、驗(yàn)證方案及報(bào)告以及接受指標(biāo)的確定依據(jù)，具體可參照GB 18280系列標(biāo)準(zhǔn)。

滅菌過程可對(duì)水凝膠或其他添加物質(zhì)(例如賦形劑等)的性質(zhì)產(chǎn)生影響。這些都宜在分析表征數(shù)據(jù)時(shí)加以考慮。在某種類別的水凝膠不適用常規(guī)滅菌方法時(shí)，宜在無菌條件下生產(chǎn)水凝膠,并考慮增加控制措施，例如參考藥品《除菌過濾技術(shù)及應(yīng)用指南》進(jìn)行除菌過濾，提供相應(yīng)的驗(yàn)證資料。需注意，經(jīng)過濾的膠原溶液的黏度可能改變分子量，宜在除菌過濾驗(yàn)證資料中加以評(píng)估。

4.7穩(wěn)定性研究

申報(bào)產(chǎn)品需參照《無源植入性醫(yī)療器械穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則》提供產(chǎn)品穩(wěn)定性研究資料。在此基礎(chǔ)上，宜將水凝膠產(chǎn)品儲(chǔ)存在溫度和pH值可調(diào)控的環(huán)境中。

貨架有效期驗(yàn)證資料中需要明確滅菌產(chǎn)品的包裝材料、包裝工藝及方法、加速老化試驗(yàn)或/和實(shí)時(shí)老化試驗(yàn)報(bào)告。加速老化試驗(yàn)中需明確試驗(yàn)溫度、濕度、加速老化時(shí)間的確定依據(jù)，論證阿列紐斯方程中各項(xiàng)參數(shù)對(duì)凝膠組分的適用性，否則宜提供產(chǎn)品實(shí)時(shí)老化試驗(yàn)報(bào)告。若申請(qǐng)人提供其他醫(yī)療器械產(chǎn)品的貨架有效期驗(yàn)證資料，則需提供其與本次申報(bào)產(chǎn)品在原材料、滅菌方法、滅菌劑量、包裝材料、包裝工藝、包裝方式及其它影響阻菌性能的因素方面具有等同性的證明資料。不同包裝、不同滅菌方式的產(chǎn)品需分別提供驗(yàn)證資料。

貨架有效期的確定需建立在科學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，如穩(wěn)定性試驗(yàn)，其目的是考察產(chǎn)品在溫度、濕度、光線、重力的影響下隨時(shí)間變化的規(guī)律，為產(chǎn)品的生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)通過試驗(yàn)建立產(chǎn)品的有效期。因此，申請(qǐng)人在申報(bào)產(chǎn)品注冊(cè)時(shí)，需對(duì)包裝完整性和包裝強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)價(jià)試驗(yàn)，如染色液穿透試驗(yàn)、氣泡試驗(yàn)、材料密封強(qiáng)度試驗(yàn)、模擬運(yùn)輸?shù)?，同時(shí)需結(jié)合產(chǎn)品性能指標(biāo)要求，提供產(chǎn)品有效期的驗(yàn)證報(bào)告及內(nèi)包裝材料信息。

申請(qǐng)人需提交運(yùn)輸穩(wěn)定性驗(yàn)證資料，可依據(jù)有關(guān)適用的國(guó)內(nèi)、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和驗(yàn)證方案進(jìn)行，如：產(chǎn)品包裝的跌落試驗(yàn)、振蕩試驗(yàn)等，提交運(yùn)輸穩(wěn)定性驗(yàn)證資料，證明在規(guī)定的運(yùn)輸條件下，運(yùn)輸過程中環(huán)境條件不會(huì)對(duì)產(chǎn)品的特性和性能造成不利影響。

（四）臨床評(píng)價(jià)資料

注冊(cè)申請(qǐng)人需在滿足注冊(cè)法規(guī)要求的前提下，按照《醫(yī)療器械臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求選擇合適的臨床評(píng)價(jià)路徑提交臨床評(píng)價(jià)資料。

本指導(dǎo)原則涉及的I型膠原軟骨修復(fù)凝膠類產(chǎn)品為高風(fēng)險(xiǎn)器械，基于目前的審評(píng)經(jīng)驗(yàn)，除《決策是否開展醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》第三部分第（一）款中可考慮免于開展臨床試驗(yàn)的情形，原則上此類產(chǎn)品需要開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)需按照《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》開展，并提交完整的臨床試驗(yàn)資料。臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)可參考《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)指導(dǎo)原則》。

申請(qǐng)人如有境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)，可參照《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求提交相關(guān)資料。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

1.產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽需符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》和YY/T 0466.1《醫(yī)療器械用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號(hào)第1部分：通用要求》中的相關(guān)要求。

2.說明書需告知使用者所有使用過程中相關(guān)的剩余風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)產(chǎn)品預(yù)期使用者的技術(shù)知識(shí)、經(jīng)驗(yàn)、教育背景、培訓(xùn)、身體狀況以及產(chǎn)品使用環(huán)境（含工作條件）有要求的，在說明書中需予以明確。

3.當(dāng)產(chǎn)品在臨床使用時(shí)需與其他產(chǎn)品配合，應(yīng)在說明書予以明確，研究資料中需有可配合使用的支持性資料。說明書中需提示，不應(yīng)過度注射或植入材料，以避免在損傷部位產(chǎn)生張力。對(duì)于固定形狀材料，說明書中需說明手術(shù)時(shí)是否可以進(jìn)行切割修整。

（六）質(zhì)量管理體系文件

按照《關(guān)于公布醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》提交相關(guān)文件。

三、參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院.醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例:中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令第739號(hào)[Z].

[2] 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.醫(yī)療器械注冊(cè)與備案管理辦法:國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第47號(hào)[Z].

[3] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式:關(guān)于公布醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告2021年第121號(hào)[Z]

[4] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定:國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號(hào)[Z].

[5] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.醫(yī)療器械分類規(guī)則:國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第15號(hào)[Z].

[6] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.醫(yī)療器械通用名稱命名規(guī)則:國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第19號(hào)[Z].

[7] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械分類目錄: 總局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械分類目錄的公告2017年第104號(hào)[Z].

[8] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)和審查指南:關(guān)于印發(fā)醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)和審查指南的通知2007年第345號(hào)[Z].

[9] 國(guó)家藥監(jiān)局器審中心.無源植入性醫(yī)療器械穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則（2022年修訂版）：國(guó)家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布無源植入性醫(yī)療器械穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則（2022年修訂版）的通告2022年第12號(hào)[Z].

[10] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械動(dòng)物試驗(yàn)研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則第一部分：決策原則（2021年修訂版）: 國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械動(dòng)物試驗(yàn)研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則（2021年修訂版）等2項(xiàng)注冊(cè)審查指導(dǎo)原則的通告2021年第75號(hào)[Z].

[11] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械動(dòng)物試驗(yàn)研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則 第二部分：試驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)施質(zhì)量保證: 國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械動(dòng)物試驗(yàn)研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則（2021年修訂版）等2項(xiàng)注冊(cè)審查指導(dǎo)原則的通告2021年第75號(hào)[Z].

[12] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則:國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則等5項(xiàng)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告2021年第73號(hào) [Z].

[13] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則: 國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告2022年第8號(hào)[Z].

[14] 中華人民共和國(guó)藥典（2020版）[Z].

[15] U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Biologics Evaluation and Research Center for Devices and Radiological Health. Preparation of IDEs and INDs for Products Intended to Repair or Replace Knee Cartilage: Guidance for Industry 2011[Z].

[16] GB/T 16886.1, 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第1部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評(píng)價(jià)與試驗(yàn) [S]. 

[17] GB/T 16886.3, 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗(yàn) [S].

[18] GB/T 16886.5, 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第5部分：體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)[S].

[19] GB/T 16886.10, 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第10部分：刺激與皮膚致敏試驗(yàn)[S]. 

[20] GB/T 16886.11, 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第11部分：全身毒性試驗(yàn)[S].

[21] GB/T 16886.20, 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第20 部分:醫(yī)療器械免疫毒理學(xué)試驗(yàn)原則和方法[S].

[22] GB/T 42062, 醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用[S].

[23] YY/T 0466.1, 醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號(hào)第1部分：通用要求[S].   

[24] YY/T 1435, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 水凝膠表征指南[S].

[25] YY/T 1453, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品  I型膠原蛋白表征方法[S].

[26] YY/T 1636, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 再生膝關(guān)節(jié)軟骨的體內(nèi)磁共振評(píng)價(jià)方法[S].

[27]  YY/T 0606.10, 組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 第10部分：修復(fù)或再生關(guān)節(jié)軟骨的植入物體內(nèi)評(píng)價(jià)指南[S].

[28] YY/T 1562, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 生物材料支架 細(xì)胞活性試驗(yàn)指南[S].

[29] YY/T 1810, 組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 用以評(píng)價(jià)軟骨形成的硫酸糖胺聚糖(sGAG)的定量檢測(cè)[S].

[30] YY/T 1805.2, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 膠原蛋白 第2部分 I型膠原蛋白分子量檢測(cè)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法[S].

[31] YY/T 1576, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 可吸收生物材料植入試驗(yàn)[S].

[32] YY/T 1561, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 動(dòng)物源性支架材料殘留α-Gal抗原檢測(cè)[S].

[33] YY/T 1876, 組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 動(dòng)物源性生物材料DNA殘留量測(cè)定法：熒光染色法[S].

[34] ISO 13019, Tissue-engineered medical products---- Quantification of sulfated glycosaminoglycans (sGAG) for evaluation of chondrogenesis[S].

[35] ASTM F2212, Standard Guide for Characterization of Type I Collagen as Starting Material for Surgical Implants and Substrates for Tissue Engineered Medical Products(TEMPs) [S].